脂质体介导兔角膜内皮细胞基因转染的观察

编号 zgly0000521244

文献类型 期刊论文

文献题名 脂质体介导兔角膜内皮细胞基因转染的观察

作者 毛晓春  张虹  李贵刚 

作者单位 华中科技大学同济医学院附属襄樊医院眼科  华中科技大学同济医学院附属同济医院眼科 

母体文献 眼科新进展 

年卷期 2007,27(7)

页码 485-488

年份 2007 

分类号 Q959.836  R772 

关键词 角膜内皮细胞  脂质体  转染 

文摘内容 目的观察阳离子脂质体Lipofectamine2000能否介导目的基因转移至兔角膜内皮细胞内及脂质体潜在的毒副作用。方法RT-PCR检测特异性胶原Ⅷ进行细胞鉴定,通过体外细胞转染实验优化阳离子脂质体与质粒DNA的浓度和比例,选择Lipo-fectamine^TM 2000/pEGFP-N1比值3∶1,脂质体体积分别为0μL、6μL、9μL、12μL转染兔角膜内皮细胞,荧光显微镜观察目的基因的表达,透射电镜观察细胞超微结构。结果RT-PCR扩增得到单一产物,与预期的扩增序列大小完全一致,角膜内皮细胞内可见脂质体介导的绿色荧光蛋白表达,Lipofectamine^TM 2000浓度能显著影响其对兔角膜内皮细胞的转染效率,存在最佳浓度,在35mm培养皿中,3μg DNA与9μL脂质体转染效率最高,透射电镜显示12μL脂质体可导致细胞器出现肿胀、崩解现象。结论阳离子脂质体可有效介导目的基因转移至角膜内皮细胞内,在35mm培养皿中,12μL脂质体对角膜内皮细胞有一定的毒副作用。