利用正交设计优化小苍兰ISSR-PCR反应体系

编号 zgly0000577421

文献类型 期刊论文

文献题名 利用正交设计优化小苍兰ISSR-PCR反应体系

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 周凌瑜  吴晨炜  唐东芹  宋会书  刘群录 

作者单位 上海交通大学农业与生物学院园林科学与工程系 

母体文献 植物研究 

年卷期 2008,28(4)

页码 402-407

年份 2008 

分类号 S718.46  Q943.2 

关键词 ISSR-PCR  小苍兰  优化  正交设计 

文摘内容 通过L16(45)正交试验,研究了镁离子浓度、dNTP浓度、模板DNA浓度、TaqDNA聚合酶浓度、引物浓度这5个因素在4个水平上对ISSR-PCR的影响,建立了适合于小苍兰ISSR-PCR的反应体系。优化体系为：25μLPCR反应体系中含有1×Taq酶缓冲液(10 mmol.L-1KCl,8 mmol·L^-1(NH4)2SO4,10 mmol·L^-1Tris.HCl,pH9.0,0.05%NP-40),2 mmol·L^-1MgCl2,0.06 U·μL^-1Taq酶,0.4μmol·L^-1引物,4.0 ng·μL^-1模板DNA,dATP、dCTP、dGTP、dTTP各0.6 mmol·L^-1。利用温度梯度PCR,确定了最适宜的退火温度为51.5℃。该优化体系的建立为下一步对小苍兰进行ISSR分子标记奠定了基础。