卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达

编号 zgly0001459761

文献类型 期刊论文

文献题名 卡尼鄂拉蜂锌转运蛋白-7相似蛋白(ZnT-7-like)的基因克隆、抗体制备及差异表达

作者 沈杰  刘振国  沈芳  吉挺 

作者单位 扬州大学动物科学与技术学院  江苏省动物遗传繁育与分子设计重点实验室 

母体文献 昆虫学报 

年卷期 2013年10期

年份 2013 

分类号 S893.9  Q966 

关键词 卡尼鄂拉蜂  王浆腺  锌转运蛋白-7相似蛋白  基因克隆  抗体制备  差异表达 

文摘内容 【目的】本研究旨在克隆卡尼鄂拉蜂Apis mellifera carnica锌转运蛋白-7相似蛋白(zinc transporter 7-like,ZnT-7-like)基因,制备ZnT-7-like多克隆抗体,了解该基因在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的差异表达情况。【方法】运用RT-PCR法从卡尼鄂拉蜂王浆腺总RNA中扩增ZnT-7-like基因,进行生物信息学分析,为避开跨膜结构的干扰,选择克隆其部分序列(273 bp)作为多肽免疫序列。将其亚克隆入原核表达载体pGEX-4T-1,转入大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中诱导表达获得融合蛋白,然后将融合蛋白纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别用间接ELISA和Western blot检测抗体的效价和特异性,最后采用实时荧光定量RT-PCR以及Western blot技术检测该基因在不同日龄成虫王浆腺中的相对表达量。【结果】克隆得到卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,大小为1 065 bp。SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白成功表达;制备的多克隆抗体效价高达1∶64 000,且具有很高的特异性。ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂5个日龄成虫中的转录情况存在较大差异,表现为3日龄成虫中的表达量极显著高于其他日龄(P<0.01),12日龄表达量最低,其他日龄间表达量两两差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01);ZnT-7-like蛋白表达与转录水平基本一致。【结论】成功克隆了卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因,制备了兔抗蜂ZnT-7-like多克隆抗体,并在转录和翻译两个水平上测定了ZnT-7-like在卡尼鄂拉蜂王浆腺中不同时期的相对表达量。这些结果为深入研究卡尼鄂拉蜂ZnT-7-like基因的功能奠定了基础。