山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备

编号 zgly0001469696

文献类型 期刊论文

文献题名 山羊IFN-γ基因的克隆表达与多克隆抗体制备

作者 安贝  赵玄多  杨雯昱  侯伟杰  高洋  陈德坤 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2014年11期

年份 2014 

分类号 S827 

关键词 山羊  IFN-γ  基因克隆  原核表达  抗体制备 

文摘内容 为获得山羊IFN-γ重组蛋白,提取山羊外周血淋巴细胞总RNA,反转录得到cDNA,以此为模板经PCR扩增获得IFN-γ的ORF区,构建重组克隆载体。经PCR扩增得到编码山羊IFN-γ成熟肽的基因序列,连入重组表达载体pET-32a,转入BL21(Codon Plus)感受态细胞中,测序并分析。重组表达载体经IPTG诱导后,对产物进行SDS-PAGE分析,并过镍柱纯化。用获得的纯化蛋白免疫家兔制备抗体。结果显示,编码山羊IFN-γ成熟肽部分的片段长432bp;SDS-PAGE分析显示,融合蛋白大小约为34.9ku,在30℃条件下,以0.3mmol/L的IPTG诱导6h,可得到大量可溶性表达的目的蛋白;间接ELISA测定制得的多克隆抗体效价为1∶106。