基于聚合酶链式反应-高通量测序(PCR-HTS)联用的cry2A基因鉴定方法

编号 zgly0001478146

文献类型 期刊论文

文献题名 基于聚合酶链式反应-高通量测序(PCR-HTS)联用的cry2A基因鉴定方法

作者 陈桂花  束长龙  李颖  宋福平  郭媛媛  李国勋  张杰 

作者单位 青岛农业大学山东省中美无脊椎动物细胞培养和细胞工程中心  中国农业科学院植物保护研究所/植物病虫害生物学国家重点实验室 

母体文献 中国生物防治学报 

年卷期 2014年05期

年份 2014 

分类号 S476 

关键词 苏云金芽胞杆菌  聚合酶链式反应  454高通量测序  cry2基因 

文摘内容 cry2基因对多种鳞翅目害虫具有高毒力,且与cry1A类基因无交互抗性,具有重要的应用价值。为了提高苏云金芽胞杆菌Bacillus thuringiensis(Bt)cry2杀虫基因资源的筛选和鉴定效率,本研究分析了所有已报到的cry2A基因的保守区,设计了4对通用引物,对2000株Bt菌株基因组DNA混合样品进行了PCR扩增,并利用454高通量测序仪对这些混合扩增产物进行了测序。测序总量有280704条Reads,序列分析结果表明,这些Bt菌株中含有已知的所有9类cry2类基因,其中包括cry2Ae和cry2Ai这2类在国内Bt菌株中未见报道的基因;同时,发现了新型cry2类基因的片段;随后设计特异性引物,扩增获得了半长基因片段cry2-1和cry2-2,进一步利用重叠PCR法获得了全长新基因cry2X,该基因的编码区为1902 bp,编码633个氨基酸;其氨基酸序列与Cry2Ab13蛋白的相似性最高,为93%,属于第三等级的模式基因。建立聚合酶链式反应-高通量测序(polymerase chain reaction-high throughput sequencing,PCR-HTS)联用的基因鉴定方法,具有快速、灵敏、准确、高通量、覆盖范围广等优点,不仅可以对Bt菌株中已知杀虫基因进行鉴定,而且能够发现新的基因,将在Bt基因鉴定、发掘中发挥重要的作用。