米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究

编号 zgly0001500773

文献类型 期刊论文

文献题名 米黑根毛霉脂肪酶在毕赤酵母中的高效表达及酶学性质研究

作者 罗文  王治元  苗长林  吕鹏梅  何东  李惠文  杨玲梅  袁振宏 

作者单位 中国科学院广州能源研究所中国科学院可再生能源与天然气水合物重点实验室  华南农业大学林学院 

母体文献 林产化学与工业 

年卷期 2016年01期

年份 2016 

分类号 TQ925.6 

关键词 米黑根毛霉脂肪酶  毕赤酵母  密码子优化  酶学性质 

文摘内容 根据毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子使用偏爱性,对米黑根毛霉脂肪酶(RML)成熟肽基因进行全面密码子优化,以提高RML基因在酵母细胞中表达的水平,并对重组脂肪酶的酶学性质进行了研究。运用重叠延伸PCR合成优化后的RML成熟肽基因,并进一步构建毕赤酵母表达载体p PIC9K-RML,通过电击法转化毕赤酵母GS115菌株,经G418抗性和PCR筛选获得高拷贝转化重组子。重组酵母菌用0.5%甲醇诱导异源基因表达,在28℃摇瓶培养168 h后酶活力达到122 U/m L,较未优化的原始菌株的表达酶活提高了10倍。重组脂肪酶最适温度为45℃,最适p H值为7,甲醇体积分数为40%以下时重组RML具有较好的稳定性。