柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其在蛋白定位中的应用

编号 zgly0001487902

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其在蛋白定位中的应用

作者 李莎  梁思婷  赵其平  韩红玉  朱顺海  翟颀  杨斯涵  黄兵  董辉 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室  上海师范大学生命与环境科学学院  云南农业大学动物科学技术学院  江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2015年02期

年份 2015 

分类号 S852.723 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  乳酸脱氢酶  单克隆抗体  免疫荧光定位 

文摘内容 为了制备柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella lactate dehydrogenase,Et LDH)单克隆抗体,用大肠杆菌表达的重组Et LDH可溶性蛋白免疫BALB/c小鼠,经5次免疫后取脾脏制备免疫脾细胞,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,经3次亚克隆后获得2株能稳定分泌Et LDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F7和2H4,抗体亚类鉴定均为Ig G1,腹水效价分别为1:8000和1:64 000。Western blot结果显示2F7抗体能识别柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中大小约为35 k Da的天然蛋白。利用该单抗对Et LDH在柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子中的分布进行了定位,结果显示该蛋白主要分布于裂殖子的细胞质,表明成功地制备了Et LDH单克隆抗体,为深入研究Et LDH的功能和特性奠定了基础。