柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

编号 zgly0001469900

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

作者 王艳歌  董辉  韩红玉  赵其平  朱顺海  李榴佳  吴有陵  黄兵 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点实验室 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2014年02期

年份 2014 

分类号 S858.31 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  乳酸脱氢酶  IFN-γ基因  293T细胞  真核表达 

文摘内容 为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella Lactate dehydrogenase,EtLDH)的真核表达质粒,分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板,PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因,PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ,并能在真核细胞中表达,为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。