柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2真核表达质粒的构建及在细胞中的表达

编号 zgly0001487903

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2真核表达质粒的构建及在细胞中的表达

作者 杨斯涵  赵其平  韩红玉  朱顺海  李莎  翟颀  梁思婷  杨亮宇  黄兵  董辉 

作者单位 云南农业大学动物科学技术学院  中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2015年02期

年份 2015 

分类号 S852.723 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  沉默信息调节因子2  DF-1细胞  BHK细胞  真核表达 

文摘内容 为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,Et SIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子c DNA为模板,PCR扩增出Et SIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体p CAGGs连接。连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行表达,用Western blot和间接免疫荧光鉴定Et SIR2基因的表达情况。结果表明:成功扩增了Et SIR2基因,长度为909 bp;Western blot可见大小约为37 k Da的表达蛋白条带;间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了Et SIR2的真核表达质粒p CAGGsEt SIR2,并能在哺乳动物细胞和禽类细胞中表达。该研究结果为深入研究Et SIR2的生物学特性和球虫DNA疫苗的研制打下了基础。