柔嫩艾美耳球虫胱硫醚β合成酶基因克隆及在真核细胞中的表达

编号 zgly0001528565

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫胱硫醚β合成酶基因克隆及在真核细胞中的表达

作者 李聪  董辉  朱顺海  朱雪龙  王自文  赵其平  夏伟丽  门启斐  黄兵  韩红玉 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室  上海师范大学生命与环境科学学院  江苏省动物动物疫病与人兽共患病防控协同创新中心 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2016年02期

年份 2016 

分类号 S852.7 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  胱硫醚β合成酶  DF-1细胞  真核表达 

文摘内容 为构建柔嫩艾美耳球虫胱硫醚β合成酶(Eimeria tenella cystathionineβ-synthase,Et CBS)基因的真核重组表达质粒p Bi FC-VC155-Et CBS,利用RACE技术克隆了Et CBS基因的全长c DNA序列,对其编码的蛋白进行相关生物信息学分析。通过RT-PCR扩增含完整开放阅读框(open reading frame,ORF)的c DNA片段,将其与真核表达载体p Bi FC-VC155连接,经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转染DF-1细胞,用免疫印迹和间接免疫荧光技术鉴定重组蛋白表达情况。结果显示,成功获得了Et CBS基因的全长c DNA序列,该基因全长2423 bp,ORF位于第201~2087 bp之间,编码629个氨基酸,编码蛋白的分子量约为68k Da。生物信息学分析发现该基因编码的蛋白不具有信号肽,也不存在跨膜结构。Western blot可见大小约为68 k Da的重组表达蛋白条带,间接免疫荧光实验显示在转染的DF-1细胞中能检测到绿色荧光。研究结果表明,本研究已成功获得了Et CBS基因的全长c DNA序列,成功构建了Et CBS基因含完整ORF的真核重组表达质粒,并在DF-1细胞中实现了表达,为深入研究Et CBS基因的功能奠定了基础。