柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1潜在子孢子互作蛋白的筛选

编号 zgly0001565687

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1潜在子孢子互作蛋白的筛选

作者 崔晓霞  黄兵  赵其平  韩红玉  朱顺海  徐帅兵  谢雨翔  唐敏  杨志远  董辉 

作者单位 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室  江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心  上海师范大学生命与环境科学学院 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2017年03期

年份 2017 

分类号 S852.723 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  顶膜抗原-1  GST pull-down  相互作用蛋白 

文摘内容 为了筛选与柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原-1(Eimeria tenella apical membrance antigen 1,EtAMA1)存在互作的子孢子蛋白,以柔嫩艾美耳球虫子孢子c DNA为模板,PCR扩增EtAMA1基因胞外区,将扩增产物与p GEX-6P-1连接,构建原核表达质粒p GEX-6P-1-EtAMA1,表达、纯化重组蛋白EtAMA1-GST。纯化的重组蛋白经Western blot验证,结果显示在75 k Da处有单一的目的条带,证实了所获得的蛋白为EtAMA1-GST融合蛋白。将EtAMA1-GST蛋白、GST蛋白和PBS分别与谷胱甘肽琼脂糖珠孵育后,再分别与子孢子裂解物共孵育,洗脱液经SDS-PAGE分析后,结果显示三者之间的条带明显不同。将差异条带切下进行质谱分析,对获得的蛋白质肽段与Uniprot中鸡球虫蛋白质数据库进行Blast比对,初步获得了10个与EtAMA1存在潜在互作的柔嫩艾美耳球虫子孢子蛋白,包括微线体蛋白、糖酵解酶类、肌动蛋白相关因子以及一些保守蛋白等,他们广泛参与了虫体的入侵、发育、能量代谢等生物学过程。研究结果为进一步阐明EtAMA1在球虫入侵宿主细胞中发挥重要作用的分子机制奠定了基础。