向日葵黄萎病病原菌轮枝菌的多重DPO-PCR检测方法

编号 zgly0001545410

文献类型 期刊论文

文献题名 向日葵黄萎病病原菌轮枝菌的多重DPO-PCR检测方法

作者 乾义柯  张娜  魏霜  陆平  易建平 

作者单位 伊犁出入境检验检疫局  伊犁师范学院  汕头出入境检验检疫局  上海出入境检验检疫局 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2017年01期

年份 2017 

分类号 S435.655 

关键词 向日葵黄萎病  黑白轮枝菌  大丽轮枝菌  多重DPO-PCR 

文摘内容 为建立可同时快速检测引起向日葵黄萎病害的2种检疫性病原菌大丽轮枝菌Verticillium dahliae Kleb.和黑白轮枝菌V.albo-atrum Reinke et Berthold的方法,根据2种病原菌的β-tubulin基因分别设计特异性DPO引物,建立多重DPO-PCR检测方法,并对其特异性和灵敏度进行评价。结果表明,所设计的DPO引物特异性强,仅大丽轮枝菌和黑白轮枝菌可分别扩增出225 bp与151 bp的特异性条带,其它向日葵病害的7种病原菌及阴性对照均无目的条带;反应体系中引物终浓度为0.2μmol/L、退火温度为60℃时,30个扩增循环的检测灵敏度均可达0.05 ng菌丝DNA量;在45~65℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段,表明该方法退火温度范围宽。所建立的检测方法能够准确、高效地检测引起向日葵黄萎病的大丽轮枝菌和黑白轮枝菌,可用于向日葵种子带菌筛查及田间病害诊断检测。