TAT—NDPK—A蛋白的构建表达及穿膜初步研究

编号 zgly0000498411

文献类型 期刊论文

文献题名 TAT—NDPK—A蛋白的构建表达及穿膜初步研究

作者 刘秋英  王一飞  熊盛  张美英  钱垂文  何旭君 

作者单位 暨南大学生物医药研究开发基地  广东省林业学校 

母体文献 中国药学杂志 

年卷期 2007,42(9)

页码 652-655

年份 2007 

分类号 R915.2 

关键词 TAT  核苷二磷酸激酶A蛋白  融合蛋白 

文摘内容 目的构建pET-TAT—nm23-H1质粒, 表达TAT-核苷二磷酸激酶A(TAT—nucleoside diphosphate kinaseA, TAT—NDPK—A)融合蛋白, 并研究融合蛋白穿膜进入A549细胞、方法人工合成编码TAT蛋白转导区域的11个氨基酸序列于NDPK—A引物的上游, PCR扩增后将融合基因克隆到pET28(a)原核表达载体上, 经WFG诱导表达、镍离子树脂色谱纯化TAT—NDPK—A蛋白, Westen—blot鉴定分析重组蛋白的抗原性, 将TAT—NDPK—A蛋白加入到A549细胞中, 荧光免疫组化检测蛋白穿膜进入细胞内。结果TAT序列与NDPK—A正确融合并插入pET28(a)载体上, 经诱导表达纯化成功获得纯度为97%的TAT—NDPK—A蛋白, 在培养的A549细胞中加入重组蛋白4h后在细胞内检测到穿膜的蛋白。结论构建表达TAT—NDPK—A蛋白, TAT序列能够引导重组蛋白穿过细胞膜进入细胞内, 为进一步研究基因的功能奠定了基础。