砂梨的ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0000660668

文献类型 期刊论文

文献题名 砂梨的ISSR-PCR反应体系的建立与优化

学科分类 220.20;森林培育学

作者 吴炼  于晓英  熊兴耀  黄笛 

作者单位 中南林业科技大学林学院  湖南农业大学园艺园林学院 

母体文献 中国农学通报 

年卷期 2010(23)

页码 254-258

年份 2010 

分类号 S661.2 

关键词 砂梨  ISSR反应体系  优化 

文摘内容 以中国南方主要栽培果树砂梨基因组为材料,采用改进的CTAB法提取叶片基因组DNA,通过单因素试脸,对ISSR-PCR反应体系中各种影响因子如dNTPs浓度、DNA模板含量,Taq DNA聚合酶量、引物用量以及最适退火温度等进行了优化和筛选,建立了适合砂梨的ISSR-PCR反应体系和应用程序为为: 20μLPCR体系中,1xTaq酶配套缓冲液,0.5UTaq DNA聚合酶,0.7μmol/L引物,100μmol/L dNTPs,2.25mmol/L MgCl2,40ng模板DNA。最佳扩增程序为: 预变性: 94℃5min;94℃变性45s,52℃退火45s,72℃延伸1min;共40个循环后,最后72℃延伸10min,4℃保存。用引物836可以将这16份砂梨材料区分开。砂梨ISSR反应体系的建立为利用分子标记技术进行砂梨品种鉴别、分类、种质资源遗传多样性分析奠定了良好基础。