SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定辣椒实蝇

编号 zgly0001312012

文献类型 期刊论文

文献题名 SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定辣椒实蝇

作者 余道坚  章桂明  陈志粦  康林  杨伟东 

作者单位 深圳出入境检验检疫局  深圳出入境检验检疫局 518001  518001 

母体文献 植物检疫 

年卷期 2006年01期

年份 2006 

分类号 S436.418 

关键词 辣椒实蝇  SYBR Green  实时荧光PCR  熔解曲线  快速鉴定 

文摘内容 本文应用SYBRGreen实时荧光PCR技术,建立了SYBRGreen实时荧光PCR快速鉴定辣椒实蝇的方法。利用辣椒实蝇mtDNACOI基因序列,筛选出种特异引物lati1/lati2。引物的特异性分别用辣椒实蝇、橘小实蝇、木瓜实蝇、杨桃实蝇、菲律宾实蝇、芒果实蝇、番石榴实蝇、瓜实蝇和南瓜实蝇等9种果实蝇来验证。0.01ng,0.1ng,1ng,10ng,20ng,40ng和100ng等7个不同浓度系列的辣椒实蝇DNA模板用来检测SYBRGreenPCR实时荧光反应的灵敏度,结果表明,SYBRGreenPCR的检测限度达1pg以下,最适模板DNA浓度为1～20ng。成虫、幼虫和蛹等3种不同虫态的辣椒实蝇有一致的扩增曲线,熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳分别用来确认实时荧光PCR产物的特异性。其平均熔解温度为77.5℃±0.1℃。获得1段长为366bp的特异性目标片段,说明在辣椒实蝇成虫为模板基础上建立的SYBRGreen实时荧光PCR方法适于幼虫、蛹的快速鉴定。