萝卜DDRT-PCR技术体系的优化

编号 zgly0001334648

文献类型 期刊论文

文献题名 萝卜DDRT-PCR技术体系的优化

作者 贾晋  张鲁刚 

作者单位 西北农林科技大学园艺学院陕西省农业分子生物学重点实验室  西北农林科技大学园艺学院陕西省农业分子生物学重点实验室 陕西杨凌712100  陕西杨凌712100 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2008年04期

年份 2008 

分类号 S631.1 

关键词 萝卜  RNA提取  DDRT-PCR  体系优化 

文摘内容 【目的】探索快速高效的RNA提取方法,建立高效率的mRNA差异显示体系。【方法】以萝卜幼嫩薹叶及花蕾为材料,比较了酸性酚-异硫氰酸胍-氯仿提取法(异硫氰酸胍法)与BIOZOL试剂法提取RNA的效果,并对DDRT-PCR体系中Taq酶、Mg2+、dNTPs、引物及cDNA用量进行了优化。【结果】BIOZOL试剂提取的RNA量大质好,经纯化后,其OD260/OD280值为1.8~2.1,表明杂质少,质量浓度大于1μg/μL,符合mRNA差异显示的要求;确定的最佳DDRT-PCR反应体系(20μL)为:10×Buffer 2.5 mmol/L,Mg2+2.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,Taq酶1.5 U,锚定引物2.5μmol/L,随机引物1.25μmol/L,cDNA用量0.5μL。mRNA差异显示结果表明,高分辨率的片断为100~1 000 bp。经验证,该体系也适用于大白菜和油菜mRNA差异显示研究。【结论】通过两种RNA提取方法比较和DDRT-PCR体系优化,获得了萝卜最佳RNA提取方法及mRNA差异显示反应体系。