猪瘟流行毒株E0蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

编号 zgly0001349415

文献类型 期刊论文

文献题名 猪瘟流行毒株E0蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

作者 李鹏  张彦明  张志  李晓成  王晶钰  张燕霞 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院  中国动物卫生与流行病学中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2008年10期

年份 2008 

分类号 S854.43 

关键词 E0基因  原核表达  间接ELISA 

文摘内容 【目的】表达猪瘟保护性抗原E0蛋白,用以建立猪瘟抗体检测方法,为进一步开发诊断试剂盒和研究E0蛋白的免疫学功能奠定基础。【方法】将猪瘟野毒株FJ237-E0基因插入原核表达载体pET32a中,以BL21(DE3)为表达菌株进行诱导表达,将表达的重组蛋白通过His亲和层析柱进行纯化,以纯化的His-E0融合蛋白作为诊断抗原,通过探索抗原包被量和抗体血清稀释倍数,建立检测猪瘟E0抗体的ELISA方法。【结果】成功克隆了CSFV E0基因,其核苷酸序列为687 bp,编码229个氨基酸。经His亲和层析柱纯化检测纯度为0.587 mg/mL;SDS-PAGE电泳结果显示,表达的E0蛋白分子质量约为50.3 ku,表达的重组蛋白为可溶性蛋白,表达量占菌体总蛋白的30%;ELISA方阵确定的最佳抗原包被量为100 ng,血清稀释倍数为1∶30,建立的ELISA方法与IDEXX公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒的阳性符合率为92.3%,阴性符合率为85.7%。【结论】建立的ELISA检测方法,不但为猪瘟抗体监测提供了一种比较实用的血清学监测手段,也为进一步开发猪瘟抗体检测试剂盒奠定了基础。