虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

编号 zgly0001468746

文献类型 期刊论文

文献题名 虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

作者 张晓明  陈武  徐春忠  彭仕明  胡俊 

作者单位 广州动物园  华南农业大学兽医学院  上海野生动物园 

母体文献 野生动物学报 

年卷期 2014年03期

年份 2014 

分类号 S852.65 

关键词 虎源猫传染性鼻气管炎病毒  PCR  原核表达  间接ELISA 

文摘内容 为研究虎源猫传染性鼻气管炎的快速诊断试剂盒和基因亚单位疫苗,根据Genbank公布的猫传染性鼻气管炎病毒的核酸序列,设计了关于虎源猫传染性鼻气管炎病毒gD蛋白基因的引物并利用PCR扩增出gD序列,成功插入到pMD18-T Simple载体中,筛选获得重组质粒,命名为pmd-gD。将其利用HindⅢ和XhoⅠ酶切后,产物克隆入原核表达载体pet-32a(+)中,获得重组质粒,命名pet-gD。用IPTG进行诱导表达,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-blot检测,结果显示目的基因在pET-32a(+)中获得了高效融合表达,其表达蛋白相对分子质量约为60kDa,与虎源猫传染性鼻气管炎病毒阳性血清发生特异性反应。以纯化的表达产物作为包被抗原,建立了检测虎源猫传染性鼻气管炎抗体的间接ELISA检测方法。本实验为虎源性猫传染性鼻气管炎诊断试剂盒和基因亚单位疫苗的研究打下了重要的基础。