蛋白激酶Cα在小鼠胚胎干细胞定向分化中对发育基因表达的调控作用

编号 zgly0000472473

文献类型 期刊论文

文献题名 蛋白激酶Cα在小鼠胚胎干细胞定向分化中对发育基因表达的调控作用

作者 高前应  葛坚  王智崇  陈慧怡  黄丹平  袁钊辉 

作者单位 中山大学中山眼科中心 

母体文献 中国生物学文摘 

年卷期 2006,20(7)

页码 15-15

年份 2006 

分类号 Q954.4  Q26 

关键词 蛋白激酶Cα  小鼠  胚胎干细胞  基因表达  调控  细胞分化  视神经疾病 

文摘内容 目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对小鼠胚胎干细胞(ESCs)定向诱导分化中发育基因(pax-6、slit-2、netrin-1)表达的影响。方法ES—BALB/c细胞株用无白血病抑制因子(mLW)的ESCs培养液培养4d, 形成胚胎体(EBs), 再分别种植于预置有盖玻片的6孔板和直径100mm的培养皿, 经5×10^-7mol/L视黄酸(RA)诱导后, 用神经细胞特异性抗原。NSE和NF-200来鉴定分化细胞的类型, 在诱导后1、3、5、7及14d用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定细胞的PKCα和发育基因的mRNA表达情况, 并观察了: PKC激活剂佛波酯(PMA)和PKC抑制剂D-鞘氨醇对它们表达的影响。结果免疫组化发现在诱导后第3d大多数细胞NSE和NF-200染色阳性, RT-PCR证实诱导后1dPKCα、pax-6和netrin-1的mRNA表达急剧下降, 3～7d逐渐升高, 至14d恢复至正常水平, 而slit-2在诱导前后均无明显表达。PMA可使PKCα、pax-6、netrin-1的mRNA水平在诱导后细胞中的表达明显增强, 而D-鞘氨醇的作用相反, 使它们的表达显著降低, 而对slit-2无明显影响。结论发育基因pax-6和netrin-1在ESCs定向分化为神经样细胞中有重要的调控作用, 可能是通过PKCα信号通路起作用。