鸭梨多酚氧化酶基因CDS区的克隆及表达

编号 zgly0000573775

文献类型 期刊论文

文献题名 鸭梨多酚氧化酶基因CDS区的克隆及表达

作者 李桂琴  李会宣  许冬倩  刘坤  张玉星 

作者单位 河北经贸大学生物科学与工程学院  河北农业大学园艺学院 

母体文献 果树学报 

年卷期 2008,25(4)

页码 577-580

年份 2008 

分类号 S661.2 

关键词 鸭梨  多酚氧化酶  基因克隆  表达 

文摘内容 以鸭梨(Pyrus bretschnei deriRehd．)果皮基因组DNA为模板，根据已经发表的多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)基因保守序列设计引物，利用PCR技术，克隆得到鸭梨多酚氧化酶编码区序列，将此核酸序列克隆到载体pGEM—T，酶切鉴定后测序，结果表明该段序列含有1782个核苷酸，编码593个氨基酸。对鸭梨多酚氧化酶基因片段的一致性分析和进化树分析表明，该片段与沙梨(Pyrus pyrifolia，AB056680)、苹果(Malusdomestica，L29450)、李(Prunussalicina，AY866432)以及杏(Prunusarmeniaca，AF020786)的一致性分别为99％、96.3％、82％和51.4％，绘制的进化树和形态学分类地位相一致。将该片段连接到表达载体pET39b上，获得的重组子命名为pET39b—PPO，热激法转化表达受体大肠杆菌BL21(DE3)菌株，用IPTG进行诱导。SDS—PAGE分析表明，PPO基因在大肠杆菌中被诱导表达蛋白质相对分子质量约66ku，检测表明具有多酚氧化酶的活性。