八角RAPD-PCR反应体系的建立及引物筛选研究

编号 zgly0000807525

文献类型 期刊论文

文献题名 八角RAPD-PCR反应体系的建立及引物筛选研究

学科分类 220.45;经济林学

作者 陈海云  陈少瑜  宁德鲁  吴涛  耿树香  谷丽萍  白平  李勇杰 

作者单位 云南省林业科学院  云南省森林植物培育与开发利用重点实验室 

母体文献 西部林业科学 

年卷期 2012(4)

页码 65-69

年份 2012 

分类号 S759.3 

关键词 八角  RAPD-PCR  反应体系  优化  引物 

文摘内容 在提取高质量八角基因组DNA的基础上,通过对其RAPD反应体系的Taq DNA聚合酶、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度等因子的优化,建立了稳定、重复性高的八角RAPD-PCR反应体系。研究结果表明,在25μL PCR反应体系中,含1.0 UTaq DNA聚合酶,0.15 mmol.L^-1 dNTPs,2.0 mmol.L^-1 Mg2+,2.0μmol.L^-1引物,20～80 ng模板。最佳反应程序为,94℃预变性5 min,扩增后94℃变性30 s,31～37℃退火30 s,72℃延伸30 s,35个循环;72℃完全延伸7 min,4℃保存。在建立RAPD-PCR反应体系的基础上,从240条RAPD引物中筛选出15条扩增条带清晰、稳定性好的引物,并通过各引物的退火温度梯度实验,确定了各引物的最适退火温度。