利用正交设计优化兴安落叶松RAPD-PCR反应体系

编号 zgly0001372701

文献类型 期刊论文

文献题名 利用正交设计优化兴安落叶松RAPD-PCR反应体系

作者 李雪峰  张含国  贯春雨  张瑶 

作者单位 东北林业大学林木遗传育种与生物技术教育部重点实验室 

母体文献 植物研究 

年卷期 2009年01期

年份 2009 

分类号 S791.22 

关键词 兴安落叶松  RAPD-PCR  正交设计  反应体系 

文摘内容 以兴安落叶松针叶DNA为模板,对影响落叶松RAPD-PCR扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立兴安落叶松RAPD-PCR反应的最佳体系。通过采用正交设计L16(45)对兴安落叶松RAPD-PCR反应的5因素(Taq酶、Mg2+、dNTP、模板DNA、引物)在4个水平上进行优化试验,结果表明兴安落叶松最佳的RAPD-PCR的反应体系(20μL)中含有模板90ng,0.5μmol·L-1的引物,1×反应缓冲液,DNTP各为0.25mmol·L-1,1U的TaqDNA聚合酶,Mg2+2.5mmol·L-1。在此基础上筛选出20个扩增稳定、多态性丰富的RAPD引物,并通过梯度PCR试验,确定了引物最佳退火温度。